Développement de nouveaux outils génétiques chez Y. lipolytica – Promoteurs inductibles et édition de génome
Equipe d’Accueil : Equipe CIMES
Intitulé de l’Unité : Catalyse et ingénierie moléculaire enzymatique
Nom du Responsable de l’Unité : Gilles Truan
Nom du Responsable de l’Équipe : Gabrielle Véronèse
Adresse : Toulouse Biotechnology Institute 135 avenue de Rangueil -31077 Toulouse Cedex 04
Responsable de l’encadrement : Florence Bordes
Tél : 05-61 55 94 87…… E-mail: Florence.bordes@insa-toulouse.fr
Résumé du projet
Yarrowia lipolytica est un micro-organisme d’intérêt car il est largement utilisé dans les industries alimentaires, pharmaceutique et environnementale. Cette levure est bien connue pour sa capacité d’accumulation de lipides, les précurseurs du biodiesel. En outre, elle présente des capacités de sécrétion élevées et effectue un large éventail de modifications post-traductionnelles, ce qui en fait un hôte prometteur pour l’expression de protéines hétérologues. Bien que plusieurs promoteurs soient actuellement disponibles pour contrôler l’expression génique chez Y. lipolytica, l’identification de nouveaux promoteurs (de force différente et ou inductibles) est toujours recherchée. Dans ce projet, nous cherchons à développer de nouveaux promoteurs et à étudier l’influence des conditions de croissance sur l’expression des gènes sous le contrôle des promoteurs sélectionnés. Certains promoteurs potentiels ont été identifiés.
Ce stage d’une durée de 3 à 4 mois, aura pour but d’utiliser les outils génétiques de base tels que le clonage de gènes, la construction de plasmides et les méthodes de transformation cellulaire pour exprimer les protéines rapportrices sous contrôle de différents promoteurs. La caractérisation de l’expression des gènes sera réalisée par l’analyse de la fluorescence de la protéine rapportrice. Avec les promoteurs nouvellement identifiés, des systèmes d’expression efficaces seront développés pour Y. lipolytica.
Par ailleurs, un travail d’ingénierie génétique de la souche pour identifier de nouveaux locus d’intégration sera initié. Le design et l’intégration de cassette rapportrices avec le système CRISPR-Cas9 développé au laboratoire sera réalisé.
Le stage se déroulera dans l’équipe Catalyse et Ingénierie Moléculaire Enzymatiques (CIMEs) localisée au Toulouse Biotechnology Institute (TBI)dans , UMR INRA/CNRS/INSA situé sur le campus de l’INSA Toulouse.
Un CV et une lettre de motivation sont à envoyer à Florence BORDES (courriel : bordes@insa-toulouse.fr) et à Christian Croux (Croux@insa-toulouse.fr)
Dernières Publications en lien avec le projet :
- Robin J., Gueroult M., Cheikhrouhou R., Guicherd M., Borsenberger V., Marty A., Bordes F. 2019. Identification of a crucial amino acid implicated in the hydroxylation/desaturation ratio of CpFAH12 bifunctional hydroxylase. Biotechnol Bioeng. 116(10):2451-2462.
- Guo Z., Borsenberger V., Croux C., Duquesne S., Truan G., Marty A., Bordes F. 2020,. An Artificial Chromosome ylAC Enables Efficient Assembly of Multiple Genes in Yarrowia lipolytica for Biomanufacturing. Commun Biol 3(1):199
- Borsenberger V., Croux C., Daboussi F., Neuvéglise C., Bordes F. Developing Methods to Circumvent the Conundrum of Chromosomal Rearrangements Occurring in Multiplex Gene Edition. ACS Synth Biol. 9(9):2562-2575