Equipe pédagogique du TP :

Catherine Etchebest, Julien Dairou, Wilfried Grange, Karine Moncoq, Stéphanie Petrella, Thérèse de Caldas

Etude intégrative d’un système enzymatique eucaryote.

Approche intégrée structure-fonction pour caractériser la glycogène phosphorylase b, enzyme à régulation allostérique.

• Exploration de la famille de cette protéine et des propriétés structurales à l’aide de l’outil Chimera.
• Prédiction de sites fonctionnels sur la base d’alignement multiples. Etude de l’impact de mutations.
• Préparation d’un extrait brut cellulaire et purification de la glycogène phosphorylase b par chromatographie d’affinité et analyse sur gel SDS-PAGE.
• Mise en évidence des propriétés allostériques de l’enzyme (à l’aide d’un effecteur) et du rôle important de certains résidus (par marquage chimique) dans cette régulation (mesures de vitesse initiale et traitement des données à l’aide d’un logiciel spécifique et/ou du langage R).
• Etude de la fixation d’un ligand par spectrofluorimétrie et mise en évidence de transfert d’énergie.
• Visualisation et analyse structure-fonction à l’aide du logiciel Pymol.

Satisfaction des étudiants 2021-2022 :

Satisfaction étudiants TP Integraprot 2021-2022

Compétences visées

• Avoir une réflexion scientifique/technique avec discussion du protocole expérimental et les outils à mettre en application
• Organiser son travail à la fois en autonomie et en équipe
• Obtenir, interpréter et restituer les résultats expérimentaux sous différentes formes (écrit et oral)
• Développer la rigueur, le sens critique et l’esprit synthétique d’analyse