Comprendre la physiopathologie de la maladie de Gaucher: bases moléculaires de la dérégulation des protéines ancrées au GPI (glycosylphosphatidylinositol, protéines associées aux GPI, GPI-AP) dans la maladie de Gaucher
Responsable du Stage : Dr Mélanie Franco
Tél : +33 (0)1 44 49 31 46 E-mail: melanie.franco@inserm.fr
Inserm U1134, Université de Pari s- Biologie Intégré du Globule Rouge
Résumé du Projet de Stage
La maladie de Gaucher (MG) est une maladie génétique rare due à une déficience en glucocérébrosidase lysosomale (GBA), altérant le catabolisme des sphingolipides dans les macrophages qui se transforment en cellules de Gaucher. Ces cellules sont considérées comme les principaux responsables de la MG mais certains aspects physiopathologiques pourraient impliquer les globules rouges (GRs) tels que l’anémie et l’inflammation.
Notre équipe a montré que la protéine Sema-7A (protéine membranaire à ancre GPI, GPI-AP) est un nouveau biomarqueur de la MG : Sema7A présente une expression diminuée à la surface des GRs issus de patients Gaucher, sa forme soluble est retrouvée augmentée dans leurs plasmas. Des résultats préliminaires suggèrent une dérégulation globale des GPI-APs dans laMG : les 2 autres GPI-APs (CD55 et CD59) érythrocytaires présentent une aussi expression diminuée.
Dans le but de mieux comprendre le rôle de GPI-APs dans cette pathologie, nous souhaitons déterminer les bases moléculaires expliquant leurs expressions diminuées.
Nos objectifs sont de tester :
- Si les GPI-APs érythrocytaires sont clivés par des facteurs externes, tels que la métalloprotéase ADAM17, l’hypoxie ou des forces de cisaillement (contraintes mécaniques).
- Si les faibles taux de GPI-APs à la surface des GRs Gaucher pourraient provenir d’un défaut de synthèse et/ou d’adressage lors de la formation des cellules érythroïdes : i) Le niveau d’expression des GPI-APs sera évalué au cours d’expériences d’érythropoïèse in vitro dans un contexte mimant la MG, ii) L’expression, l’assemblage et la localisation subcellulaire des GPI-APs seront étudiés dans un modèle d’invalidation du gène GBA dans une lignée cellulaire érythroblastique par CRISPR-Cas9 (lignée en cours de création).
A partir de sang provenant de l’EFS et de notre banque de GRs congelés issus de patients Gaucher, l’étudiant participera à ce projet qui comprendra des techniques de cytométrie en flux, de qPCR, d’ELISA, de biologie cellulaire, de microscopie et des études rhéologiques.
https://sites.google.com/view/umrs1134-team1/projects/gaucher-disease
Publications de l’équipe relatives au projet de stage
- Franco, M. et al. Blood 121, 546–555 (2013).
- Reihani, N. et al. Haematologica 101, 1489–1498 (2016).
- Dupuis, L. et al. J Cell Mol Med 24, 9726–9736 (2020).
- Franco, M. et al. Am J Hematol 95, 483–491 (2020).
Ce projet s’inscrit-il dans la perspective d’une thèse :
oui X
ED d’appartenance : ED562-BioSPC
Equipe d’Accueil : Inserm U1134, Université de Paris
Intitulé de l’Unité : Biologie Intégré du Globule Rouge
Nom du Responsable de l’Unité : Yves Colin Aronovicz
Nom du Responsable de l’Équipe : Caroline Le Van Kim
Adresse : 6 Rue Alexandre Cabanel, 75015 Paris