Impact de l’enzyme IL4-induced gene 1 sur le phénotype et la fonction des macrophages murins

Responsable du Stage : Prévost-Blondel Armelle

Tél : 01 40 51 65 24 ……  Fax : 01 40 51 65 35……… E-mail: armelle.blondel@inserm.fr

Institut Cochin

Résumé du Projet de Stage 

L’IL4-induced gene 1 (IL4I1)  est une enzyme qui catabolise principalement la phénylalanine en métabolites toxiques. Initialement détectée dans les lymphocytes B en réponse à l’IL4, son activité est également forte dans les macrophages (Mφ) et les cellules dendritiques. In vitro, cette enzyme freine la prolifération et la production d’IFNg des lymphocytes T (LT) en régulant négativement le CD3ζ, et favorise la polarisation des LT CD4+ naïfs en LT régulateurs. Nos travaux ont également mis en évidence l’impact privilégié de l’IL4I1 sur la réponse B spécifique et la signalisation en aval du BCR (Bod et al., 2018).

Dans le contexte tumoral, cette enzyme est exprimée par les Mφ infiltrant la plupart des tumeurs solides humaines. Notre équipe a démontré dans un modèle murin de mélanome spontané métastatique que l’IL4I1 contribuait à l’échappement tumoral via l’accumulation de macrophages (Mφ) intra-tumoraux (Bod et al., 2017). Dans ce modèle comme chez l’homme, l’IL4I1 au niveau du mélanome primaire est essentiellement exprimée par les Mφ (Ramspott et al., 2018). Ces données nous incitent à étudier l’impact de l’enzyme sur la fonction des Mφ dans les contextes physiologiques et tumoraux. Dans cet objectif, notre équipe a généré  des souris IL4I1flox-LysMcre+ chez lesquelles l’IL4I1 est spécifiquement inactivée dans cette population. Les souris IL4I1flox-LysMcre- de la même portée mais exprimant l’IL4I1 sauvage seront utilisées en contrôle.

L’objectif de ce stage est d’étudier les conséquences de l’inactivation de l’IL4I1 sur le phénotype et la fonction des Mφ en contexte physiologique.

Les Mφ issus du péritoine des souris conditionnelles IL4I1flox-LysMcre+ et IL4I1flox-LysMcre- seront comparés ex vivo. Ils seront marqués avec deux panels d’anticorps, ciblant notamment CMHII, CD80, CD86, CD206, PDL1, iNOS, VEGF. La cytométrie spectrale permettra de déterminer si l’expression de l’IL4I1 modifie leur phénotype (M1 versus M2) et leur capacité à produire les cytokines IL10 et IL12.

Des Mφ péritonéaux de souris IL4I1flox-LysMcre+ et IL4I1flox-LysMcre- seront également triés puis cultivés 48h avec les cellules de mélanome B16. L’imagerie des cellules en temps réel (Incucyte) permettra d’étudier si l’IL4I1 exprimée par les Mφ promeut la prolifération tumorale in vitro.

Ce stage permettra ainsi d’acquérir des compétences en expérimentation animale, en culture cellulaire et en cytométrie.

Dernières Publications en lien avec le projet :

  1. Castellano F, Prévost-Blondel A, Cohen JL, Molinier-Frenkel V. What role for AHR activation in IL4I1-mediated immunosuppression ? Oncoimmunol. 10: issue 1. 2021.
  2. Puiffe ML, Dupont A, Sako N, Gatineau J, Cohen J, Mestivier D, Le Bon A, Prévost-Blondel A, Castellano F and Molinier-Frenkel V. IL4I1 accelerates the expansion of effector CD8+ T cells at the expense of memory precursors by increasing the threshold of T cell activation. Front. Immunol. 11:600012. 2020.

3. Prévost-Blondel A & Richard Y. IL4-induced gene 1 an emerging regulator of B cell biology: which role in cutaneous melanoma? Crit Rev in Immunol. 39(1):39-57. 2019.

  1. Ramspott JP, Bekkat F, Bod L, Favier M, Terris B, Salomon A, Djerroudi L, Zaenker KS, Richard Y, Molinier-Frenkel V, Castellano F, Avril MF and Prévost-Blondel A. Emerging role of IL-4I1 as a prognostic biomarker affecting the local T cell response in human cutaneous melanoma. JID 138(12):2625-2634. 2018.
  2. Bod L, Douguet L, Auffray, C, Lengagne R, Bekkat F, Rondeau E, Molinier-Frenkel V, Castellano F, Richard Y and Prévost-Blondel A. IL4-induced gene 1: a new checkpoint blocker controlling B cell homeostasis. J Immunol. 200(3):1027-1038. 2018.
  3. Bod L, Lengagne R, Wrobel L, Ramspott JP, Kato M, Castellano F, Avril MF, Molinier-Frenkel V, and Prévost-Blondel A. IL4-induced gene 1 promotes tumor growth and modulates the tumor microenvironment in a spontaneous model of melanoma. Oncoimmunol. 6(3):e1278331. 2017.

Ce projet s’inscrit-il dans la perspective d’une thèse :

                 non x

Intitulé de l’Equipe d’accueil : Cellules dendritiques, immunostimulation du microenvironnement viral et tumoral.

Intitulé de l’Unité : Institut Cochin, Université Paris Cité, INSERM U1016, CNRS UMR8104

Nom du Responsable de l’Unité : Niedergang Florence

Nom du Responsable de l’Équipe : Hosmalin Anne

Adresse : Institut Cochin27 rue du Faubourg Saint Jacques, 75014 Paris