Identification des protéines virales impliquées dans le transport des Ribonucléoprotéines virales du RSV
Responsable de l’encadrement : Pr Marie-Anne Rameix-Welti
E-mail: marie-anne.rameix-welti@pasteur.fr
INSTITUT PASTEUR
Résumé du Projet de Stage
Le RSV est un virus ARN négatif simple brin enveloppé de la famille des Pneumoviridae. Son ARN génomique est encapsidé par la nucléoprotéine N et associé la polymérase (L) et ses co-facteurs formant la ribonucléoprotéine virale (RNP). Lors de la réplication, le complexe polymérase utilise l’ARN génomique comme matrice pour produire les nouvelles RNPs. Ces étapes ont lieu au sein d’inclusions cytoplasmiques appelées usines virales. Les RNPs nouvellement synthétisées doivent ensuite migrer depuis le cytoplasme vers les sites de bourgeonnement du virus situés à la membrane plasmique. Nous avons montré que cet export dépendait des microtubules et impliquait l’endosome de recyclage. L’objectif de ce projet est d’établir quelles sont les protéines virales impliquées dans cette étape de transport et en particulier d’étudier les roles des protéines de matrice (M) et de fusion (F) dans cette étape.
Pour ce faire, nous étudierons la localisation relative des protéines M et F par rapport aux RNPs par des approches d’immunomarquage et de microscopie confocale. Parallèlement nous étudierons l’effet d’une inhibition de l’expression de M et/ou F par ARN interférence sur l’export des RNPs. Nous analyserons i) la formation des filaments viraux à la membrane –(structure précuseur des virions) et ii) les mouvements des RNPs. Nous nous appuierons sur une méthode d’analyse des mouvements des RNPs sur cellules vivantes infectées que nous avons développée (Cosentino et al, 2022). L’ensemble de ces données nous permettra de conclure sur le role de M et F dans le transport des RNPs qui pourra ensuite être étudié plus précisement.
Ce projet met en jeu des techniques de biologie moléculaire et cellulaire, d’amplification et de culture du virus et des techniques d’imagerie.
Dernières Publications en lien avec le projet :
- Diot C, Cosentino G, Rameix-Welti MA. Ribonucleoprotein transport in Negative Strand RNA viruses Biol Cell. 2023 Jan;115(1):e2200059. doi: 10.1111/boc.202200059. Review
Cosentino G, Marougka K, Desquesnes A, Welti N, Sitterlin D, Gault E, Rameix-Welti MA. Respiratory syncytial virus ribonucleoproteins hijack microtubule Rab11 dependent transport for intracellular trafficking. PLoS Pathog. 2022 Jul 7;18(7):e1010619. doi: 10.1371/journal.ppat.1010619.
Ce projet s’inscrit dans la perspective d’une thèse
Ecole Doctorale de rattachement : SDSV UVSQ-Paris-Saclay
Laboratoire d’accueil :
Intitulé de l’Unité : Mécanismes moléculaires de multiplication des Pneumovirus M3P
Nom du Responsable de l’Unité : Pr Marie-Anne Rameix-Welti
Nom du Responsable de l’Équipe : Pr Marie-Anne Rameix-Welti
Adresse : Institut Pasteur, 25-28 rue du Dr Roux 75015 Paris