Equipe d’Accueil :

Intitulé de l’Unité : UMR 1149, Immune signaling in cancer and infection

Nom du Responsable de l’Unité : Dr V. Paradis

Nom du Responsable de l’Équipe : Dr L. Saveanu

Adresse :  Faculté de Médecine, Hopital Bichat, 16 rue Henri Huchard, 75018 PARIS

Responsable de l’encadrement : Dr Y. Sereme et Pr J-M Sallenave

Tél : 0157 277801             E-mail:  jean-michel.sallenave@inserm.fr

 

Résumé du projet 

Objectifs

Les mutations du gène CFTR responsables de la mucoviscidose entraînent une dérégulation de la réponse de l’organisme aux infections pulmonaires. Les patients sont particulièrement sensibles aux infections bactériennes, dont Pseudomonas aeruginosa (P.a), probablement partiellement à cause d’une déficience de l’activité des macrophages alvéolaires. Nous avons récemment montré au laboratoire qu’une souche vaccinale de P.a , appellée ici ‘V’est capable de protéger à 100% des souris dans un protocole de vaccination mucosale (manuscript en préparation).

Ce projet vise à disséquer les mécanismes immunitaires en jeu, en particulier étudier l’importance relative de l’immunité humorale anticorps-dépendante par rapport à l’immunité cellulaire. Après vaccination mucosale intra-pulmonaire, les anticorps seront purifiés, ainsi que les cellules immunitaires adaptatives (lymphocytes T et lymphocytes B). Ces dernières seront obtenues à partir de la rate et du poumon et réinstillées par transfert adoptif à des souris naïves qui seront ensuite infectées avec une dose létale de P.a . La survie des souris et leurs caractéristiques phénotypiques seront ensuite analysées par des techniques en place au laboratoire.

 Methodologie et résultats attendus

 1)Transfert adoptif des sera et lymphocytes de souris immunisées et suivi de la survie.

 Des souris C57/Bl6 seront vaccinées (‘prime’ et 2 rappels espacés d’une semaine) par voie oro-pharyngée avec 10^6 cfu de la bactérie PAO1 tuée à la chaleur ‘V’ selon le protocole en place au laboratoire. 7 jours après le dernier rappel, les souris seront sacrifiées, et leur sang, rate et poumons seront prélevés. Le sérum sera utilisé pour purifier les anticorps (sur billes de protein A-Sepharose) et les lymphocytes B et T seront purifiés à partir de la rate et des poumons par tri magnétique (colonnes Miltenyi).

Des transferts adoptifs d’Immunoglobulines et de lymphocytes préalablement marqués (CFSE ou CTV) provenant de rates ou de poumons immunisés ou de souris contrôles seront instillées par voie intraveineuse par transfert adoptif chez des souris naïves, qui seront subsequemment infectées avec une dose létale de P.a (10^8 cfu), et la survie sera ensuite observée.

2) Analyse mécanistique de la protection observée

 Nos résultats précédents (manuscript en préparation) nous conduisent à penser que la réponse immunitaire locale présente dans le poumon (versus celle présente dans la rate), est essentielle, suite à la vaccination,  à la protection contre le challenge létal. Nous étudierons donc la composition des cellules immunitaires (résidentes/non marquées et transférées/marquées) chez les souris receveuses afin de déterminer leur adressage (‘homing’) par des techniques de FACS classiques, et étudierons plus spécifiquement l’importance des lymphocytes T résidents mémoires (CD3+CD4+CD69+CD103+CD44+) dans la protection observée.

Dernières Publications en lien avec le projet : 1) Santamarina-Fernandez R et al. Int J Mol Sci. 2025;26:2012 ; 2) Rotrosen E and Kupper TS. Nature Rev. Immunol.  2023 ;23:655-665 ; 3) Hassert M and Harty JT. Front. Immunol. 2022. 1039194 ; 4) Iwanaga N et al. Sci.Immunol. 2021. 6 : eabf1198 ; 5) Schenkel JM and Masopust D. Immunity, 2014, 41 :886-897

Publications récentes du laboratoire 

– Born-Bony M et al. Mucosal Immunol. 2025:S1933-0219 ; Gaudin C et al. Front Immunol. 2024a;15:1398369 ; Gaudin C et al. Front Immunol. 2024b;15:1360716 ;  Kheir S et al. Mol Ther. 2022;30:355-369;  Sallenave J-M and Guillot L. Front. Immunol., 2020; -Villeret B et al. Front. Immunol. 2020 ; 11 :117 ; -Sanchez-Guzman D et al. Biomaterials. 2019;217:119308;

Ce projet s’inscrit dans la perspective d’une thèse          

 type de financement prévu : bourse du ministère

Ecole Doctorale de rattachement : BioSPC/ED562