Equipe d’Accueil :

Intitulé de l’Unité : UMR 1149, Immune signaling in cancer and infection

Nom du Responsable de l’Unité : Dr V. Paradis

Nom du Responsable de l’Équipe : Dr L. Saveanu

Adresse :  Faculté de Médecine

Responsable de l’encadrement : Dr Y. Sereme et Pr J-M Sallenave

Tél : 0157 277801      E-mail:  jean-michel.sallenave@inserm.fr

Résumé du projet (environ une demi-page)

Objectifs

Les mutations du gène CFTR responsables de la mucoviscidose entraînent une dérégulation de la réponse de l’organisme aux infections pulmonaires. Les patients sont particulièrement sensibles aux infections bactériennes, dont Pseudomonas aeruginosa (P.a), probablement partiellement à cause d’une déficience de l’activité des macrophages alvéolaires.

La mémoire immunitaire innée (MII), également appelée trained immunity, désigne la capacité du système immunitaire inné à conserver une forme de « souvenir » d’une agression précédente. Contrairement à l’immunité adaptative, cette mémoire ne repose pas sur des lymphocytes mais sur des cellules comme les monocytes, macrophages ou cellules NK. Suite à une première exposition à un agent pathogène ou un stimulus, ces cellules présentent une réponse améliorée lors d’une seconde exposition (1-3).  Ce projet vise à étudier le rôle potentiel de la MII des macrophages pulmonaires suite à une infection par P.a, leur déficience potentielle dans la mucoviscidose et leur utilité potentielle dans un protocole de vaccination.

Methodologie et résultats attendus

1)Analyse de la MII des macrophages alvéolaire in vitro/ex-vivo

Des macrophages alvéolaires de souris (MA) primaires (WT ou CFTR KO/dF508 mutées pour le CFTR), ou provenant de lignées cellulaires (MPI) seront infectées par différentes souches de P.a. A des temps variables post-infection, leur MMI sera évaluée par des infections homotypiques (avec la même bactérie P.a ) ou hétérotypiques (avec des bactéries différentes telles que Haemophilus Influenzae, Streptococcus pneumoniae… ou des virus tels que l’adénovirus ou le virus Influenza).

Les caractéristiques mémoires de ces macrophages seront étudiés par FACS (par discrimination des marqueurs CD11c/SIGLEF-F/CD11b/Ly6C/CMH-II) et en mesurant l’expression (RT-PCR, RNseq) et la production (tests CBA, ELISAs…) de cytokines inflammatoires et anti-inflammatoires (eg KC, MIP-2, CXCL-5, IL-10, TGF-b…).

En parallèle, ces MA ‘MII’, marqués au CTV (Crystal Violet) (ou provenant de souris C57/Bl6 CD451.1), seront ré-instillés voie intra-pulmonaire chez des souris receveuses C57/Bl6 CD45.2 et leur influence phénotypique sur les poumons de souris naïves ou infectées par P.a sera analysée (FACS, RNA seq, CBA/ELISA, charge bactérienne, histologie….)

2) Rôle des MA ‘MII’ dans un protocole de vaccination contre P.a

Le rôle potentiel des MA ‘MII’ sera évalué dans des protocoles de vaccination contre P.a dans des protocoles en place au laboratoire (résultats non montrés). En bref, des MA préalablement ‘mémorisés’ ou non (voir ci-dessus) seront instillés en intra-pulmonaire par transfert adoptif pendant le processus de vaccination (3 instillations à 7 jours d’intervalle). Après un challenge avec la bactérie P.a, les réponses immunitaires différentielles, ainsi que la protection tissulaire éventuelle, la charge bactérienne et la survie des animaux sera étudiée par les techniques citées plus haut.

Perspectives

Nous avons montré précédemment l’intérêt du transfert adoptif de MAs génétiquement manipulés (mais non ‘MMI’) dans un modèle d’infection pulmonaire à P.a (4). Ce projet vise à déterminer si l’utilisation de MA ‘MII’ serait intéressante dans un modèle de vaccination et permettrait de valider l’importance des paramètres ‘MII’ dans les protocoles de vaccination mucosale de façon générale.

 

Dernières Publications en lien avec le projet : 1) Kang A et al. Cell Rep.;43:114849 ; 2) Yao Y et al. Cell. 2018;175:1634-1650 ; 3) Xing Z et al. J. Leukoc Biol. 2020;108:825-834; 4) Kheir S et al. Mol Ther. 2022;30:355-369.

Publications récentes du laboratoire 

– Born-Bony M et al. Mucosal Immunol. 2025:S1933-0219 ; Gaudin C et al. Front Immunol. 2024a;15:1398369 ; Gaudin C et al. Front Immunol. 2024b;15:1360716 ;  Kheir S et al. Mol Ther. 2022;30:355-369;  Sallenave J-M and Guillot L. Front. Immunol., 2020; -Villeret B et al. Front. Immunol. 2020 ; 11 :117 ; -Sanchez-Guzman D et al. Biomaterials. 2019;217:119308;

 

Ce projet s’inscrit dans la perspective d’une thèse 

 type de financement prévu : bourse du ministère

Ecole Doctorale de rattachement : BioSPC/ED562