Caractérisation des interactions du complexe POT1-TPZ1 avec l’ADN télomérique, chez S. pombe
Responsable du Stage : Carole SAINTOMÉ & Jean CHATAIN
E-mail: jean.chatain@mnhn.fr
MNHN
Profil recherché : Biologiste, Biochimiste, Biophysicien
Résumé du Projet de Stage
Les télomères désignent les extrémités des chromosomes linéaires chez les eucaryotes. Ils sont constitués d’ADN associé à des protéines spécifiques des séquences télomériques. L’ADN télomérique est constitué d’une région double brin, dont le « brin G », riche en guanines consécutives, se prolonge du côté 3’ en une région simple brin, ce qui lui vaut l’appellation « 3’ G-overhang ». Dans la majorité des cellules eucaryotes, la séquence de l’ADN télomérique consiste en un motif répété, arrangé en tandem. Ce motif diffère selon les espèces ; chez l’homme (et plus généralement chez les vertébrés) le motif est l’hexamère TTAGGG. Les guanines consécutives sur le G-overhang peuvent former des structures d’ADN à quatre brins : les quadruplexes de guanines ou G-quadruplexes (G4). Chez l’homme et d’autres organismes, le G-overhang est protégé par la protéine POT1 (Protection Of Telomeres), une protéine de liaison à l’ADN simple-brin qui reconnait spécifiquement les séquences télomériques. POT1 est en général associée à une autre protéine télomérique, TPP1.
Au sein de l’équipe nous avons caractérisé la liaison de POT1 et de POT1/TPP1 humaines avec de longues séquences télomériques structurées en G4 multiples ; nous avons en particulier étudié la directionalité d’ouverture des G4 multiples et le rôle de TPP1 dans l’interaction du complexe POT1/TPP1 avec l’ADN télomérique.
Le stage s’inscrit dans la continuité de cette étude en s’intéressant aux protéines SpPOT1 et TPZ1 de la levure S. pombe, homologues des protéines humaines POT1 et TPP1 respectivement. Au travers d’une démarche évolutive, nous souhaitons déterminer si les caractéristiques du complexe POT1/TPP1, observées chez l’homme, sont conversées au sein des différents eucaryotes. Les objectifs du stage sont de produire et de purifier la protéine SpPOT1 et le complexe SpPOT1/TPZ1, ainsi que de caractériser les interactions de ces protéines avec l’ADN télomérique, par des approches biochimiques et biophysiques, notamment par gel retard (EMSA) et transfert d’énergie de fluorescence (FRET).
Ce projet s’inscrit-il dans la perspective d’une thèse :
à discuter
ED d’appartenance : école doctorale 227 « Science de la Nature et de l’Homme : écologie et évolution »
Equipes d’Accueil : Structure des acides nucléiques, téloméres et évolution (SANTÉ)
Intitulé de l’Unité : Structure et Instabilité des génomes
Nom du Responsable de l’Unité : Jean-Baptiste BOULÉ
Nom du Responsable de l’Équipe : Jean-François RIOU
MNHN – 43 rue Cuvier 75005 Paris